Vijfvoudige MOVAT kleuring - De wereld onder de microscoop

Ga naar de inhoud

Hoofdmenu

Vijfvoudige MOVAT kleuring

Preparaten > Histologische en histochemische kleuringen

Download deze pagina als .pdf , klik hier


Bronvermelding:
1  Wikibooks, http://nl.wikibooks.org/wiki/Oudgrieks/Telwoorden  
2  Wikipedia, de vrije Engelstalige encyclopedie,  http://en.wikipedia.org/wiki/Main_Page
3  
Artikel uit: 'Mikroskopie', Jahrgang  2, Nr. 4/2015, S. 204-208. M. Torzewski
4  Wikipedia, de vrije Nederlandstalige encyclopedie, http://nl.wikipedia.org/wiki/Hoofdpagina


Doel,

Uitvoeren van een meervoudige histologische kleuring met als doel zoveel mogelijk weefsels aan te kleuren in diverse kleuren en kleurvariaties zodat een duidelijk overzicht van de coupe verkregen wordt.


Inleiding,
De MOVAT kleuring is een pentachroom (Penta = Grieks scheikundig telwoord voor 5)[1] kleuring die oorspronkelijk is ontwikkeld door Henry Zoltan Movat in 1955. De kleuring is in 1972 vereenvoudigd door H.K. Russell[2].


Uitvoering,
De MOVAT kleuring uit het artikel is onveranderd uitgevoerd met uitzondering van enkele kleurtijden.
Het te kleuren materiaal bestond uit jonge muizen van 8 dagen oud. Gefixeerd in Bouin voor een perioden van 6 maand. Dit om het reeds gevormde botweefsel te laten ontkalken door het aanwezige picrinezuur en azijnzuur uit het fixatief. Na fixatie werden de muizen gedehydrateerd te beginnen bij ethanol 70%. Er is dus niet zoals gebruikelijk gespoeld met water, dit om te voorkomen dat het bindweefsel zal opzwellen. Na 70% volgde 85%, 95% en 100% ethanol. Alle stappen in 24uurs modus. Na de ethanolen volgden 2 stappen xyleen. Daarna werden de muizen behandeld in een mengsel van xyleen en paraplast (50%/50%). Diverse baden paraplast 100% volgden waarna de muizen werden uitgegoten in daarvoor bestemde vormen (belangrijk is dat bij het laatste paraplastbad geen xyleen meer geroken kan worden. Is dit wel het geval dan moeten de paraplastbaden opnieuw genomen worden met schone paraplast en de tijden langer genomen worden. De temperatuur mag niet hoger komen dan 62 graden Celcius). Een histologie weefselprepareerprotocol die de auteur toepast kan hier worden gedownload[3].



MOVAT

Voorgeschreven

Uitgevoerd

Alcian blauw 20min KT of 10min 56°

20 min

20 min

Spoelen leidingwater

5 min

5 min

Stabiliseren in Ethanolisch ammoniak

5 min

5 min

Spoelen leidingwater

10 min

10 min

Spoelen AD

5 sec

5 sec

Kernkleuring IJzerhaematoxyline

10 min

5 min

Spoelen AD

5 sec

5 sec

Blauwen in water

15 min

10 min

Brilliant croceine Fuchsine

10 min

10 min

Kort spoelen IJsazijn 0,5%

≈ 10 sec

≈ 10 sec

Differentiëren in fosforwolfraamzuur 5%

20 min

20 min

Spoelen IJsazijn 0,5%

2 min

2 min

Ethanol 100%

3 x 5 min

3 x 5 min

Safran du Gatinais

60 min

60 min

Spoelen AD

≈ 10 sec

≈ 10 sec

Isopropanol 100% I en II

2 x 4 min

2 x 4 min

Xylol I en II

2 x 4 min

2 x 4 min

Malinol/Euparal/Depex

 

Depex

 

Alcianblauw:
- 1g Alcianblauw oplossen in 100ml AD (verwarmen tot 60 graden);
- Na afkoeling 1ml IJsazijn 100% toevoegen en filteren.

IJzerhaematoxyline volgens Weigert:
Oplossing A: 1g Haematoxyline oplossen in 100ml ethanol 96%;
Oplossing B: 1,16g IJzer(III)chroride (FeCL3 x 6H2O) oplossen in 100ml AD, daarna 1ml zoutzuur 25% toevoegen.

Kleuroplossing: Oplossing A en B (1:1) mengen. Kleuroplossing is ongeveer 1 week houdbaar. De basisoplossingen zijn onbeperkt houdbaar.

Brillant Croceine-Fuchsine:
Oplossing A: 0,1g Brillant Croceine oplossen in 99,5ml AD. 0,5ml IJsazijn 100% toevoegen.
Oplossing B:
0,1g Fuchsine zuur oplossen in 99,5ml AD. 0,5ml IJsazijn 100% toevoegen.

Kleuroplossing: 8 delen oplossing A en 2 delen oplossing B mengen. Kleuroplossing is meerdere maanden houdbaar.

Safran du Gatinais:
- 6g Safran du Gatinais oplossen in 100ml ethanol 100%.
- voor gebruik in luchtdichte fles 48uur op 50°C verwarmen en de stof extraheren[4].  

Kleuroplossing is luchtdicht verpakt beperkt houdbaar. Om de dure kleurstof maximaal te benutten is het raadzaam de oplossing om te rekenen naar een bruikbare hoeveelheid en zo alleen te verbruiken wat benodigd is.



Resultaten,
De uitvoering van de kleuring lijkt heel omslachtig maar viel in de praktijk mee. Uiteraard is belangrijk om een langdurige kleuring goed voor te bereiden. Het inplannen van voldoende tijd is hierbij essentieel. Verder moeten alle materialen klaar staan en in een goede volgorde worden gezet zodat geen fouten gemaakt worden bij de uitvoering. De auteur maakt gebruik van een excel sheet waar alle stappen vermeld staan en afgevinkt kunnen worden. Voorbeeld hiervan staat hiernaast afgebeeld.
Om het preparaat duurzaam te maken is gekozen voor Depex als inbedhars. Een uitspraak over duurzaamheid van de kleuring kan niet worden gedaan.
De getoonde preparaatfoto's tonen de kleurenpracht van de MOVAT kleuring.    



 
 
Terug naar de inhoud | Terug naar het hoofdmenu